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本试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒，适用于从昆虫组织或培养细胞中温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

• 使用方便，从昆虫细胞，组织中提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 每500μL抽提液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  
• 取适量昆虫组织样本用剪刀尽可能剪碎，置于研钵中用液氮研磨。（没有液氮也可直接置冰上研磨即可）
  注：
  ● 样本数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  ● 由于膜蛋白含量较少，需要较多的组织或细胞才能保证得率。
  ● 用液氮研磨的方法更佳。
  
• 研磨后加入500μL提取液，混匀后移入一个预冷的干净离心管中，在2～8℃振荡1小时。（如果没有2～8℃振荡条件，也可2～8℃冰箱静置1小时，中间每隔10分钟涡旋混匀。）
  
• 将提取液在2～8℃低温下12000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入10μL抽提液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：步骤7必需保证在37℃左右离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至1～2分钟。
  
• 此时溶液会分为2层，移除上层，小心吸取下层管底部大约50μL液体。
  
• 用50～150μL试剂C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 进行下游实验时，可用试剂C分别稀释步骤8上下层的2相，取一个上层相样品同时进行实验分析。
  ● 用BCA法进行蛋白定量。蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。